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El péptido conjugado a proteínas transportadoras (KLH, BSA y OVA)
Los péptidos cortos son por lo general demasiado pequeño para provocar una respuesta inmune suficiente, por lo tanto, es necesario conjugado el péptido a una proteína portadora grande para promover una buena respuesta inmune y para generar altos niveles de específica anticuerpo. Los péptidos Crefu proporcionan a continuación enumerados proteína portadora más comúnmente utilizado para los conjugados de péptidos:
KLH (hemocianina de lapa californiana, MW 4.5x105 - 1.3x107 Da) es una proteína que contiene cobre y aislado de Megathura crenulata, y generalmente es la primera proteína portadora elección utilizado debido a su alta inmunogenicidad. KLH péptidos conjugados a menudo tienen una solubilidad limitada en agua debido a su tamaño y estructura, sin embargo, esto no afecta su inmunogenicidad y soluciones turbias puede ser utilizado para las inmunizaciones.
BSA (albúmina de suero bovino, MW 67x103 Da) es una proteína portadora popular para compuestos débilmente antigénicos debido al alto número de residuos de Lys accesibles para la conjugación. BSA es más soluble en agua que KLH porque es más pequeño; Por lo tanto, se utiliza más comúnmente en inmunoensayos. Sin embargo, debido BSA se utiliza comúnmente para bloquear los sitios de unión no específicos en ensayos basados en anticuerpos conjugados BSA no debe ser utilizado para la inmunización si el sistema de ensayo de punto final utiliza BSA. Esto es porque si antisueros frente a conjugados de péptido-BSA se utilizan en estos ensayos, los falsos positivos son comunes porque los sueros también utilizados contienen anticuerpos contra BSA.
OVA (ovoalbúmina, MW 45x103) es una proteína aislada de huevos de gallina. Se utiliza a menudo como una proteína transportadora de control para verificar que los anticuerpos son específicos para el péptido diana en lugar de la proteína portadora (por ejemplo, KLH / BSA).
En general, qué tipo de química de conjugación utilizados dependen de la secuencia del péptido antígeno proporcionado.
Reacción del Sitio
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Química |
Comentarios |
Free-NH2 grupo | Glutaraldehído | ①Recomendar N-terminal NH2 libre, evitar Lys o Pro N-terminal de la secuencia interna si es posible ②Secuencia de péptido antígeno proviene de la región interna o C-terminal de la proteína in- |
Free-COOH grupo | EDCI | ①Recomendar C-terminal libre COOH, evitar Glu o Asp en la secuencia interna si es posible ②Secuencia de péptido antígeno proviene de la región N-terminal o interna de la proteína |
Free-SH grupo | MBS/SMCC | Comúnmente utilizado enfoque, normalmente a través de la adición de una Cys adicional a la secuencia ya sea en el N-terminal o C- |