1.¿Qué metodologías de síntesis Qué Crefu péptidos utilizan para la síntesis de péptidos?
RE: Crefu péptidos han desarrollado diferentes metodologías de síntesis en fase de solución para satisfacer las necesidades de los clientes. Por lo general, se aplica la química en fase sólida Fmoc.
2.¿Cómo usted envía péptidos? ¿Qué datos de control de calidad será proporcionado?
RE: Todos los péptidos serán enviados por DHL o FedEx Express como en polvo liofilizado en viales bien etiquetados individuales, a temperatura ambiente. Con la excepción de péptidos en bruto, que sólo se comprobará mediante espectrometría de MALDI-MASS, todos los péptidos purificados sintéticos viene con informe del proyecto (CoA), MS datos y datos de HPLC. Se proporcionarán las hojas de datos que contiene las características clave, como la secuencia del péptido, la pureza, la cantidad, la modificación, los datos del espectro de masas y datos de HPLC.
3. ¿Cuál es el vuelco típico tiempo para la síntesis de péptidos? ¿Cuánto tiempo toma para enviar a mi?
RE: Nuestro típico tiempo de vuelta es de 2-3 semanas para un péptido estándar menores de 30 aminoácidos. El tiempo de vuelta varía dependiendo de la longitud del péptido, la cantidad, la solubilidad y la dificultad. Típicamente 3-5 días para llegar a investigadores de otros países.
4. ¿Cuánto tiempo se puede sintetizar?
RE: Crefu péptidos tiene una amplia experiencia en la síntesis de péptidos largos, hasta 130aa. A diferencia de muchos proveedores de péptidos que sólo están cómodos en la toma de péptidos menores de 30 años o 40aa, Crefu péptidos tiene una buena experiencia en la fabricación de péptidos que van desde 40aa a 90aa. Es difícil sintetizar péptidos largos, especialmente 100aa o más. Si va a sintetizar una secuencia de 130aa o más, por favor póngase en contacto con nosotros para la expresión de proteínas de encargo y servicio de purificación.
5. ¿Qué pasa si algunos problemas surgen durante el proceso de síntesis o purificación?
RE: Cada péptido tiene sus características específicas. Si algunos problemas ocurren durante la síntesis más allá de nuestras expectativas, y no podemos entregar su péptido a tiempo, le informaremos lo antes posible. Por casualidad, que no somos capaces de hacer que el péptido, no se le cobrará por cualquier costo.
6. Forma de sal TFA, acetato o HCl forma de sal: ¿Qué forma debería elegir?
RE: Por defecto, los péptidos se sintetizan en la sal de TFA. Para los experimentos relacionados con cultivo de células o tejidos, se debe considerar la posibilidad de péptidos producidos en forma de sal acetato o HCl al 98% o superior para evitar las respuestas anormales. Acetato o HCl forma de sal se puede solicitar a un costo adicional.
7. ¿Cuál es la vida útil de un péptido?
RE: Los péptidos son estables durante un mínimo de un año si se almacena liofilizada en el congelador. Si se disuelven los péptidos de la vida útil podría reducirse. Si péptidos contienen varios aminoácidos reactivos que pueden ser oxidados como Trp, Met pero especialmente Cys, la vida útil también puede ser reducida.
8. El péptido contiene varias cisteínas y por lo tanto puede formar fácilmente enlaces disulfuro. ¿Cómo puedo evitar esto?
RE: Si la secuencia del péptido contiene varias cisteínas, u otros aminoácidos reactivos, que se oxidan fácilmente, Crefu péptidos ofrece para entregar el péptido con restos de la fuerte reductor TDT. El péptido sólo se entrega con la TDT si esto está expresamente permitido por el cliente.
9. ¿Cómo almaceno mis péptidos sintéticos?
RE: La mayoría de los péptidos liofilizados serán estables a temperatura ambiente durante 2-3 semanas. Para el almacenamiento a largo plazo, debe almacenar péptidos liofilizados a -20 ° C. Ciclos de congelación-descongelación debe ser evitado. Permitir que alcance la temperatura ambiente antes de abrirlas. La vida útil de las soluciones de péptidos es limitado; una solución de péptido una vez preparada se debe utilizar tan pronto como sea posible.
10. ¿Cuál es la pureza del péptido en bruto y el péptido desalada? ¿Cómo se purifica el péptido? ¿Cuáles son las impurezas?
RE: Para los péptidos cortos con secuencias normales bajo 15aa, es generalmente 40-60% por HPLC para el grado crudo; 50-70% por HPLC para el grado desalada. Cuanto mayor sea el péptido, más baja es la pureza para el crudo o desalado. Los péptidos se purifican generalmente por HPLC utilizando agua y acetonitrilo gradiente. La mayoría de las impurezas son fragmentos o péptidos de supresión, incompletamente péptidos-de-protegida, y la sal residual y agua.
11. Explicación del péptido Pureza por HPLC, Total Péptido contenido contenido y Target péptido.
RE: Barcos Crefu Péptidos péptidos de acuerdo con el peso bruto del polvo liofilizado. El polvo liofilizado incluye impurezas tales como fragmentos o péptidos de supresión, péptidos incompletamente-protegidas DE, TFA y agua residual. Péptido La pureza se mide por HPLC. Es la cantidad de péptido correcta con respecto a todos los analitos que absorben a ~ 214 nm (el enlace peptídico absorbe), lo más probable deleción, truncamiento o secuencias incompletamente desprotegido, etc. Péptido pureza por HPLC no tiene en cuenta el agua y las sales que suelen estar presentes en la muestra. El contenido total de péptido es el porcentaje de péptidos total presente en relación con todo lo presente en el polvo de péptido liofilizado. El contenido total de péptido se determinó por análisis de contenido de nitrógeno. Target péptido contenido en el polvo de péptido liofilizado por lo tanto puede ser celebrado por la fórmula: Total Péptido contenido X Péptido Pureza por HPLC.
12. ¿Qué niveles de pureza están disponibles y cuál es el mejor nivel de pureza para mi aplicación?
RE: Crefu Péptidos ofrece diferentes niveles de pureza a partir de crudo, desalado,> 70% hasta> 98%.Por favor, consulte la siguiente guía, para seleccionar el grado más adecuado de pureza para su aplicación: Péptido pureza> 75%, preferiblemente> 85% La producción de anticuerpos inmunológicos aplicaciones Detección no sensible ELISA estándar para medir el título de anticuerpos Péptido pureza> 90% Los estudios no cuantitativos enzima-sustrato ensayos de fosforilación Estudios de bloqueo de péptidos no cuantitativos La purificación por afinidad Placas de cultivo de tejido de revestimiento para la unión celular Péptido pureza> 95% In-vitro bioensayos estudios SAR enzimología Investigación interacción ligando-receptor cuantitativo Ensayos de bloqueo cuantitativos Estándares cuantitativos de ELISA Péptido Pureza> 98% Ingredientes farmacéuticos activos Los ensayos clínicos Cristalografía RMN Bioensayo Sensible
Please, refer to the following guideline, to select the most suitable grade of purity for your application:
Peptide purity >75%, preferably >85%
Immunological applications Antibody production
Non-sensitive screening
ELISA standard for measuring antibody titer
Peptide purity >90%
Non-quantitative enzyme-substrate studies
Phosphorylation assays
Non-quantitative peptide blocking studies
Affinity purification
Coating tissue culture plates for cell attachment
Peptide purity >95%
In-vitro bioassays SAR studies
Enzymology
Quantitative ligand-receptor interaction research
Quantitative blocking assays
Quantitative ELISA standards
Peptide Purity >98%
Active pharmaceutical ingredients
Clinical trials Crystallography
NMR
Sensitive Bioassay
13. ¿Cuál es el método de etiquetado con fluoresceína?
RE: FITC (isotiocianato de fluoresceína) es el precursor activado utilizado para el etiquetado con fluoresceína. Para el etiquetado N-terminal eficiente, un niño de siete átomo aminohexanoil se inserta el espaciador (NH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-COOH) entre el fluoróforo (fluoresceína) y el N-terminal del péptido. Este espaciador ayuda a separar el fluoróforo a partir de su punto de unión, reduciendo potencialmente la interacción del fluoróforo con la biomolécula a la que se conjuga y haciéndolo más accesible a los reactivos de detección secundarias.
14. ¿Es el etiquetado C-terminal de biotina (o FITC) posible?
RE: Sí. Etiquetado C-terminal de la biotina (o FITC) se realiza mediante la adición de un residuo de lisina en el extremo C-terminal de un péptido, y la biotina (o FITC) está unido a la cadena lateral de la lisina a través de un enlace amida. Se elimina la carga positiva de la lisina.
15. ¿Cuál es la longitud del péptido apropiado para la producción de anticuerpos?
RE: Por lo general, se recomienda un péptido 10-25 residuos. Un péptido más largo podría tener más epítopos, pero también podría tener una mayor posibilidad de formar estructuras secundarias estables que no son formas nativas. Un péptido corto (<10 bis bis) generalmente no es bueno a menos que haya razones válidas para ello, como el potencial de homología de secuencia con un miembro de la familia relacionada u otras proteínas.
16. ¿Qué es un MAP?
RE: MAPS o Multi-péptido antigénico es un péptido ramificado en el que las cadenas de péptidos lineales están unidos en su C-terminal a través de núcleo de polilisina, aumentando así el tamaño de toda molécula. Esto se hace para eliminar el acoplamiento de péptidos a KLH. Parece que, sin embargo, la conformación de los péptidos en el mapa es menos flexible, y los anticuerpos obtenidos por MAPA suelen reconocer proteína diana con menos frecuencia que por conjugación KLH convencional. Además, no hay péptido libre producido al hacer MAPS, por lo que es difícil de quitar núcleo de polilisina anticuerpos dirigidos. Purificación de MAPS por HPLC es difícil, y MAPS se proporciona sin verificación masa debido hacer su heterogeneidad y gran tamaño molecular.
17. ¿Por qué aparece nublado mi solución péptido-KLH conjugado?
RE: KLH o hemocianina de lapa californiana es una proteína de agregación grande (MW = 4x105 - 1x107). Debido a su tamaño y estructura, su solubilidad en agua es limitada, causando un aspecto turbio. Esto no afectará a la inmunogenicidad y la solución turbia puede ser utilizado para las inmunizaciones.
18. ¿Puede explicar los picos de masa M + Na y M + K en espectros MALDI?
RE: Es muy común ver a Na (sodio) y K (potasio) aductos en el espectro MALDI. El sodio y el potasio proviene del agua utilizada en los disolventes de péptidos. Incluso destilada y agua desionizada tiene trazas de iones de sodio y potasio, que nunca pueden ser eliminados por completo. Estos se convierten en ionizada durante el proceso de espectrometría de masas MALDI y se unen a los grupos carboxilo libres del péptido. Debido a que no existe un sistema de purificación de agua que elimine todos y cada uno de sodio o iones de potasio a partir de agua, ver los aductos de sodio y de potasio, a veces es muy común e inevitable en espectrometría de masas MALDI. Esto no es una indicación de que el péptido no es puro, ni debe ser confundido con un peso molecular incorrecta.
