Estabilidad de Péptidos y vías de degradación potenciales |
| autor : administración Tiempo : 3/24/2015 1:41:51 AM |
Para evitar o reducir al mínimo la degradación del péptido se recomienda almacenar el péptido en forma liofilizada a -20 ° C o -80 ° C. Una vez en solución, el péptido / proteína debe ser almacenado congelado en alícuotas individuales para evitar los ciclos de congelación y descongelación. Asimismo, la exposición prolongada a pH> 8 se debe evitar, y las soluciones se enfriará. Finalmente, la exposición prolongada de péptidos y soluciones (especialmente a pH alto) al oxígeno atmosférico liofilizadas debe ser minimizado. El determinante principal de la estabilidad del péptido / proteína es la composición de aminoácidos y la secuencia. En general, los péptidos / proteínas suministran en un formato liofilizado son más estables que sus contrapartes en solución. Las siguientes son posibles vías de degradación de péptidos: Hidrólisis: Esto es generalmente un problema en péptidos que contienen Asp (D) en la secuencia, que es muy susceptible a la deshidratación para formar una imida cíclica intermedia. Por ejemplo, en la presencia de Asp-Pro (DP) en la secuencia, el ácido catalizada formación de imida cíclica intermedia puede dar lugar a la escisión de la cadena peptídica. Del mismo modo, en presencia de Asp-Gly (DG) en la secuencia, el compuesto intermedio cíclico se puede hidrolizar ya sea en la forma original Asp (inofensivo) o en potencialmente inactiva analógica iso-aspartato. Eventualmente, todos de la forma de aspartato puede ser completamente convertidos en el análogo iso-aspartato. En menor medida, las secuencias que contienen Ser (S) también pueden formar imida cíclica intermedia que puede llegar a la escisión de la cadena peptídica. Formación de ácido piroglutámico y dicetopiperazina: la formación de dicetopiperazina se produce normalmente cuando es Gly en la tercera posición desde el extremo N-terminal, y más especialmente si Pro o Gly está en la posición 1 ó 2. La reacción implica el ataque nucleofílico del nitrógeno N-terminal en el carbonilo de la amida entre el segundo y el tercer aminoácido, que conduce a la escisión de los dos primeros aminoácidos en la forma de una dicetopiperazina. Por otra parte, la formación de ácido piroglutámico es casi inevitable si Gln está en el N-terminal. Esta es una reacción análoga, donde los ataques de nitrógeno N-terminal de carbono del carbonilo de la cadena lateral de Gln para formar un análogo de péptido pyroglutamayl desaminado. Esta conversión se produce también en péptido que contiene Asn en el N-terminal, pero en un grado mucho menor. Racemización: Este término se utiliza libremente para referirse a la pérdida total de la integridad quiral del aminoácido o péptido. Racemización implica la conversión catalizada por base de un enantiómero (por lo general la forma L) de un aminoácido en una mezcla 1: 1 de L- y D-enantiómeros. Esto es más de una preocupación durante la síntesis de péptidos, pero un problema mucho menor en el péptido acabado. Además, esta transformación es muy difícil de detectar y difíciles de controlar. |
